Справочник Болезни и вредители медоносных пчел: 298 / Книги о животных / Мир животных.ру

жидкостями, которые прилагаются к люминесцентному микроско-
пу; при отсутствии их можно взять диметилфталат.
Глицериновый буфер готовят смешиванием девяти частей
нейтрального глицерина и одной части фосфатного буфера (рН
8,0). Препараты фиксируют этиловым или метиловым спиртом;
промывают препараты фосфатным буфером (рН 7,4), который
готовят путем смешивания 30 мл '/is M раствора однозамешенно-
го фосфорнокислого натрия или калия, 120 мл ''/is M раствора
двузамещенного фосфорно-кислого натрия и 8,78 г хлористого
натрия с 1 л дистиллированной воды.
Жидкий мед предварительно тщательно перемешивают и бе-
рут нужное количество. Пробы из засахаренного меда берут
с разной глубины щупом. Сотовый мед берут в количестве 30 г и,
удалив забрус, погружают в 15—20 мл стерильного физраствора
для полного растворения меда в ячейках сотов.
Навеску меда 15—20 г помещают в стерильную колбочку
и добавляют 25—30 мл физраствора (температура 35—40 °С).
Растворенный мед центрифугируют в течение 15 мин при
2000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к цен-
трифугату снова добавляют 25—30 мл физраствора, взбалтыва-
ют и еще раз центрифугируют. Из полученного центрифугата
параллельно делают два мазка, один из которых окрашивают по
Граму, другой, на споры,— 2 %-ным раствором карболового
фуксина и производят посевы на питательные среды. Выросшую
культуру возбудителя идентифицируют.
В тех случаях, когда из-за низкой плотности инфицирования
меда бактериологическим методом выделить возбудителей не-
льзя, можно применять метод флуоресцирующих антител с ис-
пользованием антиларвейной и антиальвейной сывороток. Для
этой цели используют следующую методику. 15—20 г меда
растворяют в 25—30 мл физраствора и центрифугируют. Из
центрифугатов делают мазки, фиксируют этиловым спиртом в те-
чение 15 мин, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфат-
ным буфером (рН 7,4) и опять высушивают. Препараты окраши-
вают прямым способом. Наносят на мазок каплю соответствую-
щей флуоресцирующей сыворотки, помещают в чашку Петри
с влажным тампоном ваты и выдерживают при температуре 37 СС
в течение 35—45 мин. Окрашенные мазки промывают тем же
буферным раствором, дважды сменяя раствор через 20 мин,
и ополаскивают дистиллированной водой. На высушенные мазки
помещают каплю буферного глицерина, покрывают тонким по-
кровным стеклом, на которое наносят нефлуоресцирующее им-
мерсионное масло, и просматривают под люминесцентным микро-
скопом МЛ-2 по общепринятой методике.
Степень свечения микробных клеток оценивают по четы-
рехбалльной системе:
+ + + + сияющее золотисто-зеленоватое свечение палочек
и спор Вас. larvae с ярко выраженными контурами микробных
клеток;