Справочник Болезни и вредители медоносных пчел: 73
нуклеазу, мочевину, крахмал; не выделяет индол; не разжижает
желатину; не изменяет молоко.
Для получения культуры от каждой пробы берут по 10 пчел,
помещают их на 30 с в 96 %-ный спирт, затем обсушивают на
стерильной фильтровальной бумаге и вскрывают. Для этого
пчелу пинцетом фиксируют за грудку, стерильной препароваль-
ной иглой удаляют спинное полукольцо со стороны заднего
грудного тергита и из грудных мышц делают посев на среду Эндо.
Одновременно из мышц готовят два мазка на предметных стек-
лах, окрашивают один метиленовой синькой, второй по Граму
и просматривают с помощью иммерсионной системы микроскопа.
Посевы выращивают при комнатной температуре (20 °С). На
МПА бактерии гафнии растут в виде полупрозрачных, круглых,
с ровными краями колоний, легко снимающихся петлей. Из коло-
ний готовят мазки, красят по Граму, микроскопируют и сравнива-
ют с микрофлорой мазков из грудных мышц. Грамотрицательные
бактерии исследуют на подвижность. Подвижные грамотрица-
тельные бактерии пересевают на МПА, а затем делают посевы на
цветной ряд Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, сахарозой
и сорбитом; на среду с цитратом аммония; в две пробирки со
средой Кларка; в МПБ с индикаторными бумажками на индол
и сероводород и на желатину. Посевы бактерий на среде с цитра-
том аммония и в одной пробирке со средой Кларка выращивают
при комнатной температуре, остальные — при 35 °С. С культура-
ми, выращенными на среде Кларка при 35 °С, ставят реакцию
с метилротом, а при 20 °С — реакцию Фогес — Проскауэр на
ацетилметилкарбинол. Желатину охлаждают.
Срок бактериологического исследования на гафниоз пчел
4 дня.
С е р о л о г и ч е с к а я д и а г н о с т и к а гафниоза пчел
основана на постановке реакции агглютинации возбудителя со
специфической сывороткой.
Для постановки реакции агглютинации необходимы:
а) стандартная культура Hafnia alvei (стандартный анти-
ген);
б) гипериммунная сыворотка; ее получают от кроликов, для
этого животному вводят внутривенно выращенную на МПА
суточную культуру возбудителя в концентрации 3—5 млрд. мик-
робных тел в 1 мл 4 раза через 5 дней в следующих количествах:
при первой инъекции — 0,5 мл, второй — 1 мл, третьей — 1 мл,
четвертой — 1,5 мл. Через 7—10 дней после четвертой инъекции
у кролика берут кровь и получают сыворотку; ее можно использо-
вать в течение 10 мес при условии хранения в холодильнике при
температуре 4 °С;
в) нормальная сыворотка кролика;
г) физраствор, содержащий 0,85 % химически чистого на-
трия хлорида и 0,5 % карболовой кислоты;
д) исследуемый антиген — смыв бактериальной культуры,
содержащий 3—5 млрд. микробных тел в 1 мл. Для этого берут
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 48-2 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305